15P-1-Zellen
Allgemeine Informationen
Beschreibung | Die Zelllinie 15P-1 wurde aus transgenen Hodenzellen der Maus gewonnen, die PyLT im Samenepithel exprimieren und Merkmale von Sertoli-Zellen aufweisen, wie die Transkription der Gene WT1 und Steel. Die 15P-1-Zellen weisen eine phagozytische Aktivität auf, die bei der Interaktion mit Keimzellen verstärkt wird. Die 15P-1-Zellen helfen auch bei der Differenzierung von diploiden prämeiotischen Keimzellen in haploide Spermatiden, die das Prm-1-Gen exprimieren. Wenn die 15P-1-Zellen mit unreifen Hodenzellen von 9 Tage alten Tieren kultiviert werden, bilden die Zellen Tetraden haploider Zellen mit der Morphologie runder Spermatiden und initiieren die Protamin-Transkription. Außerdem setzen die 15P-1-Zellen ein Material frei, das empfindlich auf Proteasen reagiert und ein breites Spektrum an antibakterieller Aktivität aufweist. Die Aktivität dieses Materials wird durch Fraktionen erhöht, die reich an runden Spermatiden und Nervenwachstumsfaktoren sind. Sowohl Sertoli- als auch 15P-1-Zellen exprimieren das KL-Protein, das ein Ligand des Kit-Rezeptors ist. |
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Organismus | Maus, transgene |
Gewebe | Hoden |
Merkmale
Alter | 6 Monate |
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Geschlecht | Männlich |
Morphologie | Epithelial |
Wachstumseigenschaften | Adhärent |
Identifikatoren / Biologische Schutzstufe / Zitation
Zitat | 15P-1 (Cytion-Katalognummer 305191) |
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Biosicherheitsstufe | 1 |
Expression / Mutation
Handhabung
Nährboden | DMEM, w: 4,5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamin, w: 1,5 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natriumpyruvat (Cytion-Artikelnummer 820300a) |
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Mittlere Supplemente | Supplemente des Mediums mit 10% FBS |
Passage-Lösung | Accutase |
Subkultivierung | Entfernen Sie zunächst das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Calcium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten. |
Splitverhältnis | 1:2 bis 1:5 |
Medienwechsel | 2 bis 3 Mal pro Woche |
Einfriermedium | CM-1 (Cytion Katalognummer 800100) oder CM-ACF (Cytion Katalognummer 806100) |
Handhabung von kryokonservierten Kulturen |
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Qualitätskontrolle / Genetisches Profil / HLA
Sterilität | Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen. Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft. |
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