HEK293 EBNA-Zellen
Produktnummer:
300264
Allgemeine Informationen
Beschreibung | Die Transfektion von Säugetierzellen in großem Maßstab hat sich zu einer unverzichtbaren Technologie in der wissenschaftlichen Gemeinschaft entwickelt. Sie ermöglicht die effiziente Produktion von r-Proteinen im Milligramm-zu-Gramm-Bereich innerhalb eines kurzen Zeitrahmens, nur wenige Tage nach der Klonierung von cDNAs in den geeigneten Expressionsvektor. Unter den verschiedenen verfügbaren Zelllinien sticht die HEK293-Zelllinie, die das Epstein-Barr-Virus-Kernantigen-1 stabil exprimiert (HEK293-EBNA1 oder 293E), als die am häufigsten verwendete Zelllinie für Transfektionsexperimente im großen Maßstab hervor. Einer der entscheidenden Vorteile der Verwendung von HEK293-EBNA1-Zellen ist ihre Kompatibilität mit Expressionsvektoren, die den Epstein-Barr-Virus-Replikationsursprung (oriP) tragen, wie z. B. der pTT-Vektor. Diese Kompatibilität führt zu einer erheblichen Verbesserung der Ausbeute an r-Proteinen um das Dreifache im Vergleich zur Verwendung eines Nicht-oriP-Vektors. Durch die Nutzung dieses Potenzials können Forscher nun eine höhere Ausbeute ihrer gewünschten r-Proteine erzielen und so ihren Forschungs- und Entwicklungszielen näher kommen. |
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Organismus | Menschen |
Gewebe | Embryonale Niere |
Synonyme | HEK293-EBNA, 293 c18, 293c18, HEK 293 c18, HEK-293 c18, HEK293-EBNA1, HEK-293-EBNA, HEK 293-EBNA, HEK 293 EBNA, HEK293EBNA, 293 EBNA, 293-EBNA1, 293-EBNA, 293/EBNA, 293EBNA, EBNA-293, EBNA293, HEK293E, HEK/EBNA, HEK-EBNA, HEK.EBNA, 293/EBNA-1 |
Merkmale
Alter | Fötus |
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Geschlecht | Weiblich |
Morphologie | Epithelial |
Wachstumseigenschaften | Adhärent |
Identifikatoren / Biologische Schutzstufe / Zitation
Zitat | HEK293 EBNA (Cytion Katalognummer 300264) |
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Biosicherheitsstufe | 2 |
Expression / Mutation
Antigenexpression | EBNA1 |
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Viren | Adenovirus 5 (Transformant), EBV (exprimiert EBNA1) |
Handhabung
Nährboden | DMEM, w: 4,5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamin, w: 1,5 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natriumpyruvat (Cytion-Artikelnummer 820300a) |
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Mittlere Supplemente | Supplemente des Mediums mit 10% FBS |
Passage-Lösung | Accutase |
Subkultivierung | Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten. |
Einfriermedium | CM-1 (Cytion Katalognummer 800100) oder CM-ACF (Cytion Katalognummer 806100) |
Handhabung von kryokonservierten Kulturen | HEK293 EBNA-Zellen werden in tiefgefrorenem Zustand auf Trockeneis versandt. Vergewissern Sie sich bei Erhalt, dass das Fläschchen gefroren ist. Lagern Sie das Kryovial sofort bei Temperaturen unter -150 Grad. Wenn Sie die Zellen sofort kultivieren wollen, tauen Sie das Fläschchen schnell auf, indem Sie es 40-60 Sekunden lang in einem 37 Grad warmen Wasserbad mit sauberem Wasser und einem antimikrobiellen Mittel schütteln. Entfernen Sie das Fläschchen, sobald sich ein kleiner Eisklumpen gebildet hat, und stellen Sie sicher, dass es kalt bleibt. Führen Sie alle weiteren Schritte unter aseptischen Bedingungen durch. Desinfizieren Sie das Kryovial unter einer sterilen Abzugshaube mit 70%igem Ethanol. Anschließend das Fläschchen vorsichtig öffnen und die Zellsuspension in ein 15-ml-Zentrifugenröhrchen überführen, das mit 8 ml Kulturmedium bei Raumtemperatur gefüllt ist. Die Zellen vorsichtig mischen. Zur Zellseparation 3 Minuten lang bei 300 x g zentrifugieren und den Überstand entsorgen. Das Auslassen der Zentrifugation ist fakultativ, allerdings sollten etwaige Reste des Gefriermediums nach 24 Stunden entfernt werden. Das Pellet vorsichtig in 10 ml frischem Kulturmedium resuspendieren und auf zwei T25-Kulturflaschen aufteilen. Für die weiteren Schritte das Subkulturprotokoll befolgen. |
Qualitätskontrolle / Genetisches Profil / HLA
Sterilität | Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl mit PCR-basierten Assays als auch mit lumineszenzbasierten Mykoplasmen-Nachweisverfahren rigoros ausgeschlossen. Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft. |
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