CTLA4 Ig-24-Zellen
Produktnummer:
305014
Allgemeine Informationen
Beschreibung | CTLA4 Ig-24-Zellen, die von einem adulten weiblichen chinesischen Hamster (Cricetulus griseus) stammen, sind eine spontan immortalisierte Zelllinie, die durch die Einführung des menschlichen CTLA-4-Gens genetisch verändert wurde, was zur Expression eines Fusionsproteins führt. Das Fusionsprotein besitzt eine dominante Eigenschaft von CTLA4Ig, was CTLA4 Ig-24-Zellen zu einem einzigartigen und unverzichtbaren Instrument in der immunologischen Forschung macht. CTLA-4, ein Mitglied der Immunglobulin-Superfamilie, wird hauptsächlich in aktivierten T-Zellen exprimiert und wirkt als hemmender Signalübermittler zur Regulierung der T-Zellfunktion. Es hat eine gemeinsame Homologie mit CD28, einem ko-stimulatorischen Protein der T-Zellen, und beide Moleküle binden an die Proteine CD80 (B7-1) und CD86 (B7-2) auf Antigen-präsentierenden Zellen. CTLA-4 weist eine größere Affinität und Avidität für CD80 und CD86 auf als CD28, wodurch es CD28 bei der Bindung an diese Liganden übertrumpfen kann. Auf diese Weise sendet CTLA-4 ein hemmendes Signal an T-Zellen, während CD28 ein stimulierendes Signal sendet. Dieser komplizierte Regulationsmechanismus ist entscheidend für die Aufrechterhaltung des Immungleichgewichts und die Verhinderung übermäßiger Immunreaktionen. Interessanterweise ist CTLA-4 auch in regulatorischen T-Zellen (Tregs) zu finden und trägt zu deren hemmender Funktion bei. Wenn T-Zellen über den T-Zell-Rezeptor (TCR) und CD28 aktiviert werden, steigt die Expression von CTLA-4. Außerdem kann CTLA-4 die Zellmotilität und die Signalübertragung über den PI3-Kinase-Signalweg beeinflussen. |
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Organismus | Hamster |
Gewebe | Eierstock |
Synonyme | CTLA4Ig-24 |
Merkmale
Geschlecht | Weiblich |
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Morphologie | Epithelial |
Wachstumseigenschaften | Adhärent |
Identifikatoren / Biologische Schutzstufe / Zitation
Zitat | CTLA4 Ig-24 (Cytion Katalognummer 305014) |
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Biosicherheitsstufe | 1 |
Expression / Mutation
Handhabung
Nährboden | DMEM, w: 4,5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamin, w: 1,5 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natriumpyruvat (Cytion-Artikelnummer 820300a) |
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Mittlere Supplemente | Supplementierung des Mediums mit 10% FBS, 0,2 mM Prolin, 0,001 mM Methotrexat |
Passage-Lösung | Accutase |
Subkultivierung | Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten. |
Splitverhältnis | 1: 3 bis 1: 4 |
Medienwechsel | 2 bis 3 Mal pro Woche |
Einfriermedium | CM-1 (Cytion Katalognummer 800100) oder CM-ACF (Cytion Katalognummer 806100) |
Handhabung von kryokonservierten Kulturen | CTLA4 Ig-24-Zellen werden in tiefgefrorenem Zustand auf Trockeneis versandt. Vergewissern Sie sich bei Erhalt, dass das Fläschchen gefroren ist. Lagern Sie das Kryovial sofort bei Temperaturen unter -150 Grad. Wenn Sie die Zellen sofort kultivieren wollen, tauen Sie das Fläschchen schnell auf, indem Sie es 40-60 Sekunden lang in einem 37 Grad warmen Wasserbad mit sauberem Wasser und einem antimikrobiellen Mittel schütteln. Entfernen Sie das Fläschchen, sobald sich ein kleiner Eisklumpen gebildet hat, und stellen Sie sicher, dass es kalt bleibt. Führen Sie alle weiteren Schritte unter aseptischen Bedingungen durch. Desinfizieren Sie das Kryovial unter einer sterilen Abzugshaube mit 70%igem Ethanol. Anschließend das Fläschchen vorsichtig öffnen und die Zellsuspension in ein 15-ml-Zentrifugenröhrchen überführen, das mit 8 ml Kulturmedium bei Raumtemperatur gefüllt ist. Die Zellen vorsichtig mischen. Zur Zellseparation 3 Minuten lang bei 300 x g zentrifugieren und den Überstand entsorgen. Das Auslassen der Zentrifugation ist fakultativ, allerdings sollten etwaige Reste des Gefriermediums nach 24 Stunden entfernt werden. Das Pellet vorsichtig in 10 ml frischem Kulturmedium resuspendieren und auf zwei T25-Kulturflaschen aufteilen. Für die weiteren Schritte das Subkulturprotokoll befolgen. |
Qualitätskontrolle / Genetisches Profil / HLA
Sterilität | Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl mit PCR-basierten Assays als auch mit lumineszenzbasierten Mykoplasmen-Nachweisverfahren rigoros ausgeschlossen. Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft. |
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