D283Med-Zellen
Produktnummer:
300330
Allgemeine Informationen
Organismus | Menschen |
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Gewebe | Gehirn |
Krankheit | Medulloblastom |
Anwendungen | 3D-Zellkultur, Neurowissenschaften |
Synonyme | D283 Med, D283 MED, D283-MED, D283_Med, D-283 Med, D-283MED, D283MED, D283-Med, D-283, D283, Med 283, H283 |
Merkmale
Alter | 6 Jahre |
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Geschlecht | Männlich |
Ethnizität | Europäisch |
Morphologie | Epithelial |
Wachstumseigenschaften | Cluster in Suspension/Adhärent |
Identifikatoren / Biologische Schutzstufe / Zitation
Zitat | D283Med (Cytion Katalognummer 300330) |
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Biosicherheitsstufe | 1 |
Expression / Mutation
Proteinexpression | glutaminsynthetase positiv, neuronenspezifische Enolase positiv, gliafibrilläre saure Proteine negativ, S100 (S-100) Protein negativ |
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Isoenzyme | AK-1, 1, ES-D, 1, G6PD, B, GLO-I, 2, Me-2, 0, PGM1, 1, PGM3, 1 |
Tumorigene | Ja, in Nacktmäusen |
Karyotyp | Der Karyotyp ist 45, xY, -7, -8, -17, -20, der(20)t(1,20)(q12,q13), 8q+, 17p+ (Bereich = 41 bis 46). Es handelt sich um eine hypodiploide Zelllinie mit einer Häufigkeit höherer Ploidien von 5,4 %. Drei Markerchromosomen sind in allen Zellen vorhanden. Diese sind: der(20)t(1,20)(q12,q13), 8q+ und 17p+. N7, N17 und N20 haben einzelne Kopien. Das einzelne x ist strukturell normal, und das Y-Chromosom ist vorhanden, wie durch Fluoreszenzmikroskopie bestätigt wurde. |
Handhabung
Nährboden | EMEM, w: 2 mM L-Glutamin, w: 1,5 g/L NaHCO3, w: EBSS, w: 1 mM Natriumpyruvat, w: NEAA (Cytion-Artikelnummer 820100c) |
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Mittlere Supplemente | Supplemente des Mediums mit 10% FBS |
Subkultivierung | Suspensionszellen in einem 15-ml-Röhrchen sammeln und die anhaftenden Zellen vorsichtig mit PBS ohne Kalzium und Magnesium spülen (3-5 ml PBS für T25-, 5-10 ml für T75-Zellkulturflaschen). Accutase zugeben (1-2 ml pro T25-, 2,5 ml pro T75-Zellkulturflasche), die Zellschicht muss vollständig bedeckt sein. Bei Raumtemperatur 10 Minuten lang inkubieren, dann die in Suspension wachsenden Zellen und die adhärenten Zellen zusammen zentrifugieren. Die Zellen vorsichtig resuspendieren und in neue Flaschen mit frischem Medium geben. |
Einfriermedium | CM-1 (Cytion Katalognummer 800100) oder CM-ACF (Cytion Katalognummer 806100) |
Handhabung von kryokonservierten Kulturen | D283Med-Zellen werden in tiefgefrorenem Zustand auf Trockeneis versandt. Vergewissern Sie sich bei Erhalt, dass das Fläschchen gefroren bleibt. Lagern Sie das Kryovial sofort bei Temperaturen unter -150 Grad. Wenn Sie die Zellen sofort kultivieren wollen, tauen Sie das Fläschchen schnell auf, indem Sie es 40-60 Sekunden lang in einem 37 Grad warmen Wasserbad mit sauberem Wasser und einem antimikrobiellen Mittel schütteln. Entfernen Sie das Fläschchen, sobald sich ein kleiner Eisklumpen gebildet hat, und stellen Sie sicher, dass es kalt bleibt. Führen Sie alle weiteren Schritte unter aseptischen Bedingungen durch. Desinfizieren Sie das Kryovial unter einer sterilen Abzugshaube mit 70%igem Ethanol. Anschließend das Fläschchen vorsichtig öffnen und die Zellsuspension in ein 15-ml-Zentrifugenröhrchen überführen, das mit 8 ml Kulturmedium bei Raumtemperatur gefüllt ist. Die Zellen vorsichtig mischen. Zur Zellseparation 3 Minuten lang bei 300 x g zentrifugieren und den Überstand entsorgen. Das Auslassen der Zentrifugation ist fakultativ, allerdings sollten etwaige Reste des Gefriermediums nach 24 Stunden entfernt werden. Das Pellet vorsichtig in 10 ml frischem Kulturmedium resuspendieren und auf zwei T25-Kulturflaschen aufteilen. Für die weiteren Schritte das Subkulturprotokoll befolgen. |
Qualitätskontrolle / Genetisches Profil / HLA
Sterilität | Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl mit PCR-basierten Assays als auch mit lumineszenzbasierten Mykoplasmen-Nachweisverfahren rigoros ausgeschlossen. Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft. |
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