MOLT-4-Zellen
Einführung in die MOLT-4-Zelllinie
Beschreibung | MOLT-4 ist eine T-Lymphoblasten-Zelllinie, die aus dem peripheren Blut eines 19-jährigen männlichen Patienten mit akuter lymphoblastischer Leukämie (ALL) im Rezidiv 1971 gewonnen wurde. Sie ist eine Schwesterzelllinie von MOLT-3, während MOLT-4 ein ungewöhnliches T-Zell-Antigenrezeptor-Gamma-Ketten-Gen-Rearrangement (T-Gamma) aufweist. MOLT-4-Zellen haben eine Verdopplungszeit von etwa 30 Stunden, wachsen in Suspension und sind in unbehandelten Nacktmäusen, mit Anti-Lymphozyten-Serum behandelten Mäusen und x-bestrahlten Mäusen tumorigen. MOLT-4-Zellen haben eine hypertetraploide Chromosomenzahl, wobei die modale Chromosomenzahl von 95 in 24 % der Zellen vorkommt, zeigen aber stabile und wiederkehrende strukturelle Anomalien der Chromosomen und eine längere Telomerlänge. MOLT-4 exprimiert eine Vielzahl von T-Zell-Markern wie CD1, CD2, CD3A, CD3B, CD3C, CD4, CD5, CD6 und CD7. Sie exprimieren auch hohe Mengen an terminaler Desoxynukleotidyltransferase (TdT). Die MOLT-4-Zelllinie produziert kein Immunglobulin oder Epstein-Barr-Virus. Der Patient, von dem die Zellen stammen, hatte zuvor eine multiresistente Chemotherapie erhalten. Es liegt eine G -> A-Mutation am Codon 248 des p53-Gens vor, und P53 wird nicht exprimiert. Die Linie war ursprünglich mit Mykoplasmen kontaminiert, wurde aber inzwischen mit Antibiotika geheilt. |
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Organismus | Menschen |
Gewebe | Peripheres Blut |
Krankheit | Akute lymphoblastische T-Leukämie bei Erwachsenen |
Synonyme | Molt-4, MOLT 4, Molt 4, MOLT.4, MOLT4, Molt4, GM02219, GM02219C, GM2219C, GM02219D |
Spezifikationen
Alter | 19 Jahre |
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Geschlecht | Männlich |
Ethnizität | Kaukasisch |
Morphologie | Runde Zellen |
Zelltyp | T-Lymphozyt |
Wachstumseigenschaften | Aufhängung |
Dokumentation
Zitat | MOLT-4 (Cytion Katalognummer 300115) |
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Biosicherheitsstufe | 1 |
Genetische Merkmale
Proteinexpression | p53 positiv |
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Antigenexpression | CD1 (49%), CD2 (35%), CD3 A (26%) B (33%) C (34%), CD4 (55%), CD5 (72%), CD6 (22%), CD7 (77%) |
Viren | Die Zellen produzieren kein Immunglobulin oder Epstein-Barr-Virus (Minowada, 1972). |
Produkte | Es werden hohe Mengen an terminaler Desoxynukleotidyltransferase (TdT) produziert |
Mutationsprofil | G -> A-Mutation am Codon 248 des p53-Gens, wird P53 nicht exprimiert (Rodrigues, 1990). |
Karyotyp | Hypertetraploid. Modalzahl: 96. Zwei X- und zwei Y-Chromosomen. |
Methoden der Zellkultivierung
Nährboden | RPMI 1640, w: 2,1 mM stabiles Glutamin, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion-Artikelnummer 820700a) |
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Mittlere Supplemente | Supplemente des Mediums mit 10% FBS |
Subkultivierung | Die Kulturen durch regelmäßige Zugabe oder Austausch des Mediums aufrechterhalten. Kulturen mit einer Dichte von 2 x 10^5 Zellen/ml anlegen und die Zellkonzentration für optimales Wachstum im Bereich von 1 x 10^5 bis 1 x 10^6 Zellen/ml halten |
Aussaatdichte | 1 x 10^5 Zellen/cm^2 |
Medienwechsel | 2 bis 3 Mal pro Woche |
Wiederherstellung durch Einfrieren | 24 bis 48 Stunden |
Einfriermedium | CM-1 (Cytion Katalognummer 800100) oder CM-ACF (Cytion Katalognummer 806100) |
Handhabung von kryokonservierten Kulturen | MOLT-4-Zellen werden in tiefgefrorenem Zustand auf Trockeneis versandt. Vergewissern Sie sich bei Erhalt, dass das Fläschchen gefroren ist. Lagern Sie das Kryovial sofort bei Temperaturen unter -150 Grad. Wenn Sie die Zellen sofort kultivieren wollen, tauen Sie das Fläschchen schnell auf, indem Sie es 40-60 Sekunden lang in einem 37 Grad warmen Wasserbad mit sauberem Wasser und einem antimikrobiellen Mittel schütteln. Entfernen Sie das Fläschchen, sobald sich ein kleiner Eisklumpen gebildet hat, und stellen Sie sicher, dass es kalt bleibt. Führen Sie alle weiteren Schritte unter aseptischen Bedingungen durch. Desinfizieren Sie das Kryovial unter einer sterilen Abzugshaube mit 70%igem Ethanol. Anschließend das Fläschchen vorsichtig öffnen und die Zellsuspension in ein 15-ml-Zentrifugenröhrchen überführen, das mit 8 ml Kulturmedium bei Raumtemperatur gefüllt ist. Die Zellen vorsichtig mischen. Zur Zellseparation 3 Minuten lang bei 300 x g zentrifugieren und den Überstand entsorgen. Das Auslassen der Zentrifugation ist fakultativ, allerdings sollten etwaige Reste des Gefriermediums nach 24 Stunden entfernt werden. Das Pellet vorsichtig in 10 ml frischem Kulturmedium resuspendieren und auf zwei T25-Kulturflaschen aufteilen. Für die weiteren Schritte das Subkulturprotokoll befolgen. |
Qualitätssicherung von Molt-4-Leukämiezellen
Sterilität | Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl mit PCR-basierten Assays als auch mit lumineszenzbasierten Mykoplasmen-Nachweisverfahren rigoros ausgeschlossen. Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft. |
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STR profile |
CSF1PO: 11,12
D13S317: 12,13
D16S539: 11,14
D5S818: 12
D7S820: 8,10,11
TH01: 6,8
TPOX: 8
vWA: 17,18
D3S1358: 15,16
D21S11: 28,29,30
D18S51: 12,13,17
Penta E: 14,15,16
Penta D: 8,12,13
D8S1179: 9,13,14
FGA: 22,24
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HLA-Allele |
A*: 01:01:01, 25:01:01
B*: 18:01:01, 57:01:01
C*: 06:02:01, 12:03:01
DRB1*: 07:01:01, 12:01:01
DQA1*: 02:01:01, 05:05:01
DQB1*: 02:02:01, 03:01:01
DPB1*: 02:01:02
E: 01:01:01G
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Erforderliche Produkte
In der biologischen Forschung ist die Kryokonservierung von Säugetierzellen ein unschätzbares Instrument. Die erfolgreiche Konservierung von Zellen hat oberste Priorität, da der Verlust einer Zelllinie durch Kontamination oder unsachgemäße Lagerungsbedingungen zu Zeit
- und Geldverlusten führt und letztlich die Forschungsergebnisse verzögert. Sobald die Zellen von einem Zellwachstumsmedium in ein Einfriermedium überführt wurden, werden sie in der Regel mit einer geregelten Geschwindigkeit eingefroren und in flüssigem Stickstoffdampf oder bei unter -130°C in einem mechanischen Tiefkühlschrank gelagert. Das Einfriermedium CM-1 ermöglicht die Kryokonservierung von Zellen bei unter -130°C (oder in flüssigem Stickstoff), wodurch ein zusätzlicher, kostspieliger Ultratiefkühlschrank überflüssig wird und zeitaufwändige und anspruchsvolle Einfrierprozesse mit kontrollierter Rate entfallen. Die Zellen werden einfach entnommen, das Wachstumsmedium abgesaugt, in CM-1 resuspendiert, in ein Kryovial überführt und bei einer Temperatur von unter -130 °C gelagert.
Lange Haltbarkeitsdauer
CM-1 ist ein serumhaltiges, gebrauchsfertiges Kryokonservierungsmedium, das bis zu einem Jahr im Kühlschrank gelagert werden kann.
Hunderte von Forschern vertrauen darauf
Unser fortschrittliches Zelleinfriermedium CM-1 ist ein marktführendes Produkt in Deutschland und Europa und zeichnet sich durch zahlreiche Publikationen mit Hunderten von verschiedenen Zelllinien weltweit aus. Wir haben es mit mehr als 1000 Zelllinien aus unserer firmeneigenen Zellbank getestet.
Optimierte Inhaltsstoffe
CM-1 enthält Serumprodukte. Serumhaltige Kryokonservierungsmedien schützen die Zellen während des Einfrierens optimal und haben den Vorteil einer hohen Rückgewinnungsrate. Da CM-1 mit einer Vielzahl von Zelllinien getestet wurde, können Sie sich darauf verlassen, dass sich Ihre Zellen immer gut erholen.
Enthält FBS, DMSO, Glukose, Salze
Pufferkapazität pH = 7,2 bis 7,6
Anwendungen & Validierung
Die in unserem Einfriermedium CM-1 konservierten Zellen können für die Zellzählung, Lebensfähigkeit und Kryokonservierung, Zellkultur, Säugetierzellkultur, Genexpressionsanalyse und Genotypisierung, In-vitro-Transkription und Polymerase-Kettenreaktionen verwendet werden. Die Wirksamkeit jeder Charge wird anhand von CHO-K1-Zellen bewertet. Jede Charge wird auf pH-Wert, Osmolalität, Sterilität und Endotoxine getestet, um eine hohe Qualität zu gewährleisten.
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS) ist eine vielseitige Pufferlösung, die in vielen biologischen und chemischen Anwendungen sowie bei der Gewebeverarbeitung eingesetzt wird. Unsere PBS-Lösung ist mit hochwertigen Inhaltsstoffen formuliert, um einen konstanten pH-Wert während der Experimente zu gewährleisten. Die Osmolarität und die Ionenkonzentration unserer PBS-Lösung sind auf die des menschlichen Körpers abgestimmt, so dass sie isotonisch und für die meisten Zellen nicht toxisch ist.
Zusammensetzung unserer PBS-Lösung
Unsere PBS-Lösung ist eine pH-angepasste Mischung aus hochreinen Phosphatpuffern und Kochsalzlösungen. Bei einer 1fachen Arbeitskonzentration enthält sie 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 8 mM Na2HPO4 und 2 mM KH2PO4. Wir haben diese Zusammensetzung auf der Grundlage von CSHL-Protokollen und der Molekularen Klonierung nach Sambrook gewählt, die in der Forschungsgemeinschaft etablierte Standards sind.
Anwendungen unserer PBS-Lösung
Unsere PBS-Lösung ist ideal für eine Vielzahl von Anwendungen in der biologischen Forschung. Aufgrund ihrer isotonischen und ungiftigen Eigenschaften eignet sie sich perfekt für die Verdünnung von Substanzen und das Spülen von Zellbehältern. Unsere PBS-Lösung mit EDTA kann auch zum Lösen von angehefteten und verklumpten Zellen verwendet werden. Es ist jedoch wichtig zu beachten, dass zweiwertige Metalle wie Zink nicht zu PBS hinzugefügt werden dürfen, da dies zu Ausfällungen führen kann. In solchen Fällen werden Good's Puffer empfohlen. Darüber hinaus hat sich unsere PBS-Lösung als akzeptable Alternative zu viralen Transportmedien für den Transport und die Lagerung von RNA-Viren, wie z. B. SARS-CoV-2, erwiesen.
Lagerung unserer PBS-Lösung
Unsere PBS-Lösung kann bei Raumtemperatur gelagert werden und ist somit leicht zu verwenden und zugänglich.
Zusammenfassend
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass unsere PBS-Lösung bei vielen biologischen und chemischen Experimenten ein wesentlicher Bestandteil ist. Aufgrund ihrer isotonischen und ungiftigen Eigenschaften eignet sie sich für zahlreiche Anwendungen, von der Zellkultur bis zum Virustransportmedium. Durch die Wahl unserer hochwertigen PBS-Lösung können Forscher ihre Experimente optimieren und genaue und zuverlässige Ergebnisse erzielen.
Zusammensetzung
Bestandteile
mg/L
Anorganische Salze
Kaliumchlorid
200,00
Kaliumdihydrogenphosphat
200,00
Natriumchlorid
8,000.00
di-Natriumhydrogenphosphat wasserfrei
1,150.00