NCI-H1299-Zellen
Produktnummer:
300485
Einblicke in NCI-H1299-Lungenkrebszellen
Beschreibung | NCI-H1299, auch bekannt als H1299, ist eine Zelllinie, die aus einer Lymphknotenmetastase der Lunge eines 43-jährigen weißen männlichen Patienten mit Karzinom gewonnen wurde. H1299 und H292 sind Zelllinien für nicht-kleinzelligen Lungenkrebs (NSCLC). Was ihr genetisches Profil betrifft, so weisen H1299-Zellen eine homozygote partielle Deletion des p53-Proteins auf und besitzen keine Expression des p53-Proteins. Während KRAS-Mutationen bei verschiedenen Krebsarten, einschließlich NSCLC, häufig vorkommen, exprimiert H1299 KRAS WT. A549 ist eine weitere NSCLC-Zelllinie, die homozygot endogenes KRAS G12S exprimiert. Das Verständnis der Biologie von KRAS und seiner nachgeschalteten Signalwege ist entscheidend für die Entwicklung wirksamer Krebstherapien. Daher wird diese epithelialähnliche Zelllinie häufig in der Krebs- und Immunonkologieforschung eingesetzt. Die Morphologie der H1299-Zellen ist durch anhaftende, abgeflachte Zellen mit einer Dicke von weniger als 5 Mikrometern gekennzeichnet. H1299-Zellen haben eine ungefähre Verdopplungszeit von 22 bis 30 Stunden. H1299-Zellen exprimieren Keratin und Vimentin, sind aber negativ für das Neurofilament-Triplet-Protein. Sie sind auch in der Lage, das Peptid Neuromedin B (NMB) in einer Menge von 0,1 pmol/mg Protein zu synthetisieren, nicht aber das Gastrin-freisetzende Peptid (GRP). Im Vergleich zu A549-Zellen mit eher epithelialen Merkmalen weisen H1299-Zellen eher mesenchymale Merkmale und eine weniger effektive Expression von Epithelmarkern auf. |
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Organismus | Menschen |
Gewebe | Lunge |
Krankheit | Karzinom |
Synonyme | H1299, H-1299, NCIH1299 |
Einzelheiten
Alter | 59 Jahre |
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Ethnizität | Kaukasisch |
Wachstumseigenschaften | Adhärent |
Merkmale der kleinzelligen Lungenkrebszellen H1299
Zitat | NCI-H1299 (Cytion-Katalognummer 300485) |
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Biosicherheitsstufe | 1 |
Ausprägung/Mutation
Handhabung
Nährboden | RPMI 1640, w: 4,5 g/L Glucose, w: 2 mM L-Glutamin, w: 10 mM HEPES, w: 1 mM Natriumpyruvat, w: 1,5 g/L NaHCO3 (Cytion-Artikelnummer 820702a) |
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Mittlere Supplemente | Supplemente des Mediums mit 10% FBS |
Passage-Lösung | Accutase |
Subkultivierung | Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten. |
Medienwechsel | 2 bis 3 Mal pro Woche |
Einfriermedium | CM-1 (Cytion Katalognummer 800100) oder CM-ACF (Cytion Katalognummer 806100) |
Handhabung von kryokonservierten Kulturen | NCI-H1299-Zellen werden in tiefgefrorenem Zustand auf Trockeneis versandt. Vergewissern Sie sich bei Erhalt, dass das Fläschchen gefroren ist. Lagern Sie das Kryovial sofort bei Temperaturen unter -150 Grad. Wenn Sie die Zellen sofort kultivieren wollen, tauen Sie das Fläschchen schnell auf, indem Sie es 40-60 Sekunden lang in einem 37 Grad warmen Wasserbad mit sauberem Wasser und einem antimikrobiellen Mittel schütteln. Entfernen Sie das Fläschchen, sobald sich ein kleiner Eisklumpen gebildet hat, und stellen Sie sicher, dass es kalt bleibt. Führen Sie alle weiteren Schritte unter aseptischen Bedingungen durch. Desinfizieren Sie das Kryovial unter einer sterilen Abzugshaube mit 70%igem Ethanol. Anschließend das Fläschchen vorsichtig öffnen und die Zellsuspension in ein 15-ml-Zentrifugenröhrchen überführen, das mit 8 ml Kulturmedium bei Raumtemperatur gefüllt ist. Die Zellen vorsichtig mischen. Zur Zellseparation 3 Minuten lang bei 300 x g zentrifugieren und den Überstand entsorgen. Das Auslassen der Zentrifugation ist fakultativ, allerdings sollten etwaige Reste des Gefriermediums nach 24 Stunden entfernt werden. Das Pellet vorsichtig in 10 ml frischem Kulturmedium resuspendieren und auf zwei T25-Kulturflaschen aufteilen. Für die weiteren Schritte das Subkulturprotokoll befolgen. |
Qualitätskontrolle von H1299-Zellen
Sterilität | Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl mit PCR-basierten Assays als auch mit lumineszenzbasierten Mykoplasmen-Nachweisverfahren rigoros ausgeschlossen. Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft. |
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