Wir bieten hochwertige Zelllinien an, darunter menschliche Zellen, tierische Zelllinien, fluoreszenzmarkierte Zelllinien, iPSC-Linien sowie verschiedene menschliche Primärzellen (menschliche mesenchymale Stammzellen, Fibroblasten, follikuläre dendritische Zellen, HUVEC, orale Zellen).

Darüber hinaus können Sie mehr als 30 verschiedene serumhaltige Medien und 10 serumfreie Medien für die Kultivierung und Erhaltung verschiedener Zelltypen erwerben.

Zu unseren Dienstleistungen gehören Virustests, Mykoplasmennachweis, Zelllinienauthentifizierung, Zellbanking und Speziesidentifizierung. Darüber hinaus bieten wir Bulk- und Sonderanfertigungen an.

Falls vorhanden, finden Sie die Quellenangaben bei dem jeweiligen Produkt.

Multiplizieren Sie die durchschnittliche Zellzahl aus jedem der 16 Eckquadrate des Hämozytometers mit 10.000. Die endgültige Anzahl der lebensfähigen Zellen pro Milliliter Probe erhält man, indem man die Ausgangszahl mit 5 multipliziert, um die durch die Zugabe von Trypanblau verursachte 1:5-Verdünnung zu berücksichtigen. Beispiel:

• (50 + 40 + 45 +52) ÷ 4 = 46.75
• 75 x 10,000 (10^4) = 467,500
• 467.500 x 5 = 2.337.500 lebende Zellen/ml in der ursprünglichen Zellsuspension
• Alternativ können Sie auch ein automatisches Zellzählgerät wie den CellDrop von DeNovix oder den NucleoCounter NC-200 von Chemometec verwenden.

Wir empfehlen dringend, die Zellen nach Erhalt für eine sehr kurze Zeit (höchstens 1 Tag) bei -80°C auf Trockeneis zu lagern und so bald wie möglich mit der Kultivierung zu beginnen. Wenn eine sofortige Kultivierung nicht möglich ist, müssen die Kryovials bei Temperaturen unter -150°C gelagert werden. Die Qualität der permanenten Zelllinien sollte innerhalb von 60 Tagen nach Erhalt kontrolliert werden. Herangehensweise:

1. Auftauen der Zellen
2. Bestimmen Sie die Lebensfähigkeit der Zellen
3. Kultur der Zellen
4. Stellen Sie Ihren eigenen Masterstock her.

Alle in unserem Shop erhältlichen Medien müssen bei 4 °C im Kühlschrank gelagert werden. Die verfügbaren Supplemente haben unterschiedliche Lagerbedingungen. Bitte beachten Sie die Angaben auf den mitgelieferten Datenblättern.

• Bringen Sie Wasser in einem Becherglas auf eine Temperatur von 37 °C.
• Entnehmen Sie eine Küvette mit Zellen vorsichtig aus dem Flüssigstickstofflager und schützen Sie dabei Ihre Hände und Augen.
• Lösen Sie den Deckel der Küvette 10 Sekunden lang, damit der flüssige Stickstoff aus dem Gewinde entweichen kann, und schrauben Sie ihn dann wieder zu.
• Zum Auftauen einfach die untere Hälfte des Fläschchens vier Minuten lang in das 37 °C warme Wasser tauchen.
• Wischen Sie die Außenseite des Fläschchens mit einer Desinfektionslösung ab und stellen Sie es in eine Laminar-Flow-Kulturhaube der Klasse II, Typ A, sobald der Inhalt aufgetaut ist, bis nur noch ein kleines Stück Eis übrig ist.
• Um die Zellen zu dispergieren, öffnen Sie das Fläschchen und pipettieren die Suspension mit einer 1-mL-Pipette auf und ab.
• Entnehmen Sie 20 µl und geben Sie dann 20 µl Trypanblaulösung zu der Zellsuspension (z. B. Kat. Nr. 15250-061).
• Verwenden Sie ein Hämozytometer oder ein automatisiertes Zellzählsystem, um die Anzahl der lebensfähigen Zellen pro Milliliter zu berechnen.
• Den Inhalt des Fläschchens (1 ml) auf die in der Gebrauchsanweisung angegebene Konzentration verdünnen.
• Nach der Beimpfung das Medium in den Flaschen schütteln, um die Zellen zu dispergieren. Zahlreiche Zelltypen haften schnell an Kulturoberflächen; wird das Medium nicht sofort nach der Beimpfung gleichmäßig verteilt, können die Zellen ungleichmäßig wachsen.
• Halten Sie die Kulturen in einem Zellkulturbrutschrank bei 37 Grad Celsius mit 5% Kohlendioxid und 95% Luftfeuchtigkeit. Idealerweise sollte die Kultur nach dem Anlegen mindestens 24 Stunden lang in Ruhe gelassen werden.

Die Informationen über das Zellkulturmedium, das wir für eine bestimmte Zelllinie empfehlen, finden Sie auf der Produktseite für die jeweilige Zelllinie sowie in der Produktinformation. Die gebräuchlichsten Zellkulturmedien sind sowohl als Basis- als auch als gebrauchsfertige Formulierungen (z.B. mit FBS und anderen Supplementen) erhältlich.

Einige Zelllinien wie NFS-60 oder TF-1 benötigen spezielle Inhaltsstoffe in ihrem Kulturmedium. Unsere konditionierten Medien sind eine gute Versorgung mit diesen Faktoren.

Für die Kryokonservierung der Zellen in flüssigem Stickstoff empfehlen wir entweder CM-1, das Serum enthält, oder das serumhaltige Einfriermedium CM-ACF.

Unsere Produktpalette umfasst auch lebende Zellkulturen. Je nach Zelltyp handelt es sich um adhärente oder suspendierte Zellen.

Nach dem Auftauen und Ausplattieren kryokonservierter Zellen sollte der erste Mediumwechsel nach 24 Stunden oder über Nacht erfolgen, um restliches DMSO und tote Zellen zu entfernen. Das Medium sollte dann alle 24-48 Stunden gewechselt werden, bis die Zellen für die Weitergabe bereit sind. Die Protokolle für die einzelnen Zelllinien enthalten genauere Anweisungen.

Unsere kryokonservierten Zelllinien oder Lebendkulturen können erweitert und erneut kryokonserviert werden. Allerdings kann der Prozess der Kryokonservierung die Wachstumsleistung der Zellen verändern.

Wir raten davon ab, die Zellen vor dem Ausplattieren aus dem Kryokonservierungsmedium zu schleudern. Wenn die Zentrifugation mit zu hohen Geschwindigkeiten durchgeführt wird, kann sie die Zellen schädigen. In unseren Zellkulturlabors haben wir festgestellt, dass DMSO bei niedrigen Konzentrationen für die Zellen unbedenklich ist. Wir empfehlen, die Zellen in Kulturmedium zu verdünnen, bis der endgültige DMSO-Gehalt weniger als 0,4 % (v/v) beträgt.

Für die meisten unserer Zellen benötigen Sie keine spezielle Oberflächenmatrix für die 2D-Kultur. Nur unsere induzierten pluripotenten Stammzellen (hiPSCs) benötigen ein Kultursubstrat, das die Pluripotenz aufrechterhält. Hier empfehlen wir die Verwendung von iMatrix oder Matrigel.

Für die Ablösung der meisten von uns gelieferten Zellen (mit Ausnahme z. B. einiger Keratinozytenzellen wie HaCaT) empfehlen wir die Verwendung von Accutase, das die Zellen sanft vom Boden der Zellkulturflasche ablöst. Accutase funktioniert bei den meisten Zelllinien. Falls alternative Ablöselösungen benötigt werden, sind diese in der spezifischen Produktinformation der Zelllinie angegeben.

Wenn Zellen aus einem Gewebe abgetrennt werden, um eine Primärkultur zu erzeugen, bildet sich aufgrund der Fähigkeit der Zellen, sich in vitro zu vermehren, ein konfluenter Monolayer oder eine dichte Zellsuspension.

Nach dem traditionellen Konzept wird nach der ersten Entnahme und Subkultivierung dieser Population eine Zelllinie erzeugt (Freshney, R.I. (1987). Methods used to grow new tissues from animal cells. (New York: Alan R. Liss, Inc.) Eine Einführung in die Grundlagen. Im Laufe der Existenz einer Zelllinie werden sich die Zellen mit dem größten Wachstumspotenzial durchsetzen, was zu einer gewissen genetischen und verhaltensmäßigen Homogenität führt.

In dieser Terminologie wird eine Zellpopulation, die eine genetische Veränderung erfahren hat, die ein unendliches Wachstum ermöglicht, als kontinuierliche Zelllinie bezeichnet. Kontinuierliche Zelllinien sind in der Regel aneuploid. Auch wenn es möglich ist, kontinuierliche Zelllinien durch eine große Anzahl von Subkulturen zu kultivieren, besteht die Gefahr, dass bei diesen sehr hohen Passagenzahlen zusätzliche genotypische und damit auch phänotypische Veränderungen auftreten. Die Unsterblichkeit kann auf verschiedene Weise erreicht werden, unter anderem auf natürlichem Wege oder mit Hilfe von Viren oder Chemikalien. Es ist zu verstehen, dass verschiedene Forschungsteams leicht unterschiedliche Definitionen dieser Konzepte verwenden können. Viele Forscher vermeiden es, eine Population als "Zelllinie" zu bezeichnen, solange sie nicht nachweisen können, dass sie eine Art genetische Mutation durchlaufen hat.

Eine kleine Teilmenge von Zellen, die entweder durch Klonen oder auf andere Weise positiv aus einer Kultur selektiert wurde, wird als Zellstamm bezeichnet. Seit der Etablierung der ursprünglichen Elternlinie haben die meisten Zellstämme erhebliche genetische Veränderungen erfahren. Einige Untergruppen von Zellen können tumorigener geworden sein als die ursprüngliche Linie, oder der Transfektionsprozess kann zur Schaffung eines neuen Stammes geführt haben.

Zelltypen, zu denen Keratinozyten und Melanozyten gehören, sind Sammlungen von Zellen, die einen gemeinsamen Phänotyp haben. Deshalb kann man mit Sicherheit sagen, dass die Keratinozyten eines jeden Spenders derselbe Zelltyp sind.

Stammzellen helfen bei der Produktion neuer Zellen in gesundem Gewebe und können bei der Reparatur von verletztem oder beschädigtem Gewebe helfen. Sie dienen als Grundlage für die verschiedenen Zelltypen, aus denen jedes Organ im Körper besteht. Stammzellen unterscheiden sich von anderen Zellen durch ihre Fähigkeit, sich selbst zu erneuern, sich über einen längeren Zeitraum zu vermehren und sich unter bestimmten Bedingungen in spezialisierte Zellen mit unterschiedlichen Funktionen (Phänotypen) zu differenzieren, darunter Herzzellen, Leberzellen, Fettzellen, Knochenzellen, Knorpelzellen, Nervenzellen und Bindegewebszellen. Unter Multipotenz versteht man die Fähigkeit von Zellen, sich in eine Vielzahl anderer Zelltypen zu differenzieren. Die Erkenntnisse der Wissenschaftler über die Regulierung der Stammzelldifferenzierung können als Grundlage für die Entwicklung neuartiger Behandlungen für eine Vielzahl lebensbedrohlicher Krankheiten und Verletzungen dienen.

Aus somatischen (adulten, nicht keimbahnspezifischen) Zellen, die in einen embryonalen stammzellähnlichen Zustand zurückversetzt wurden, entstehen induzierte pluripotente Zellen. Wie embryonale Stammzellen sind auch iPS-Zellen pluripotent, da sie sich in jede Zelle des Körpers differenzieren können. Bei der Erzeugung dieser Zellen, die gemeinhin als "Reprogrammierung" bezeichnet wird, werden über Retroviren drei bis vier Gene für Transkriptionsfaktoren in eine Körperzelle eingeschleust.

Neuere Techniken haben die Anzahl der für die Transformation erforderlichen Gene ersetzt und reduziert, alternative Methoden der Genverabreichung eingesetzt oder versucht, Gene durch chemische Faktoren zu ersetzen. Bei Patienten mit Krankheiten wie ALS, Parkinson oder Herz-Kreislauf-Erkrankungen können ihre Zellen zur Bildung von iPS-Zellen veranlasst werden. Nach der Differenzierung in spezialisiertere Zelltypen können iPS-Zellen auf vielfältige Weise eingesetzt werden, z. B. für die Entwicklung von Tests zur Untersuchung von Krankheitsprozessen, für das Screening von Arzneimittelkandidaten auf Sicherheit und Wirksamkeit sowie für die regenerative Medizin.

Die Angaben zur Haltbarkeit unserer Produkte finden Sie in den Sicherheitsdatenblättern beim jeweiligen Produkt als pdf-Datei unter Produktinformationen/Downloads.

Es wird nicht empfohlen, unsere Zellkulturmedienprodukte unter 4 °C zu lagern. Für unsere Supplemente verwenden Sie bitte die individuellen Sicherheitsdatenblätter, um Informationen zur Lagerung zu erhalten.