COS-1-Zellen: Ein zelluläres Arbeitspferd in Genexpressionsstudien
Die COS-1-Zelllinie ist eine fibroblastenähnliche Zelle, die aus dem Nierengewebe eines Affen stammt und häufig von Forschern zur Untersuchung des Affenvirus SV40 eingesetzt wird. Diese Zellen lassen sich leicht transfizieren und werden häufig zur Herstellung rekombinanter Proteine für verschiedene biochemische, molekulare und zellbiologische Experimente verwendet.
Dieser Artikel enthält umfassende Informationen über die COS-1-Zelllinie und deckt alle wesentlichen Informationen ab, die Sie benötigen. Insbesondere werden Sie Wissen über Folgendes erlangen:
- COS-1-Zelllinie: Herkunft und allgemeine Informationen.
- Vor- und Nachteile von COS-1-Zellen
- Forschungsanwendungen von COS-1-Zellen
- COS-1-Zellen: Veröffentlichungen
- Ressourcen für die COS-1-Zelllinie, einschließlich Protokollen, Videos und mehr
- Kultivierung von COS-1-Zellen
1.cOS-1-Zelllinie: Herkunft und allgemeine Informationen.
Bevor man mit einer Zelllinie arbeitet, ist es wichtig, ein grundlegendes Verständnis für die Zelllinie selbst zu haben. Dazu gehören Informationen wie die Herkunft der Zellen, wie sie isoliert wurden und ihre Eigenschaften. In diesem Abschnitt werden wir uns mit den Grundlagen der COS-1-Zellen befassen.
Was ist die COS-1-Zelllinie?
Bei der COS-1-Zelllinie handelt es sich um fibroblastenähnliche Zellen, die J.W.F. Cowell und Kollegen 1981 erstmals herstellten. Diese Zellen wurden durch die Transformation einer als CV-1 bekannten Epithelzelllinie des grünen Affen mit einer mutierten Form des Simian-Virus SV40 erzeugt. Anschließend wurde die etablierte COS-1-Zelllinie gründlich charakterisiert, um die Region des SV40-Genoms wiederherzustellen, die zuvor aus dem Replikationsursprung entfernt worden war. Diese Zellen exprimieren große T-Antigene und andere Proteine, die für die korrekte Replikation zirkulärer Genome, wie z. B. Plasmide, erforderlich sind.
COS-1-Zellen haben eine fibroblastenähnliche Morphologie, haften an Oberflächen und breiten sich als Monolayer aus. Derzeit sind keine genetischen Varianten der COS-1-Zelllinie bekannt. Eine verwandte Zelllinie, COS-7, ist jedoch ebenfalls aus CV-1-Zellen hervorgegangen und weist ähnliche Eigenschaften auf.
2.vor- und Nachteile von COS-1-Zellen
Die COS-1-Zelllinie hat einzigartige Vorteile und Einschränkungen, die wir im Folgenden erörtern werden.
Vorteile
- Transfektion ist möglich: Die COS-1-Zelllinie lässt sich mit verschiedenen Methoden, einschließlich physikalischer und chemischer Ansätze, leicht transfizieren.
- Herstellung von Lentiviren: Die COS-1-Zelllinie ist ein geeigneter Verpackungswirt für die Herstellung hochwertiger rekombinanter Lentiviruspartikel ohne zusätzliche Reinigungsschritte. Diese Zellen haften fest an Kunststoffoberflächen, was eine Kontamination der Transfektionsüberstände mit Viruspartikeln verhindert [1].
- Genexpression: Die COS-1-Zelllinie wird häufig für Studien zur transienten und stabilen Expressionsanalyse verwendet und produziert viele rekombinante Proteine durch Transfektion mit zirkulären Plasmiden, die den SV40-Replikationsursprung enthalten [2].
Beschränkungen
- Nicht-menschliche Zelllinie: Da COS-1-Zellen von nicht-menschlichen Primaten stammen, sind rekombinante Proteine, die mit dieser Zelllinie hergestellt werden, nur für Laborexperimente geeignet und können nicht für den menschlichen Gebrauch empfohlen werden.
3.forschungsanwendungen von COS-1-Zellen
Eine der wichtigsten Überlegungen bei der Diskussion über eine Zelllinie sind ihre Forschungsanwendungen. In diesem Abschnitt werden die wichtigsten Forschungsanwendungen von COS-1-Zellen untersucht.
- Rekombinante Proteinproduktion: Die COS-1-Zelllinie wird häufig für die Herstellung rekombinanter Proteine durch transiente oder stabile Transfektion zirkulärer Vektoren mit dem SV40-Replikationsursprung verwendet. In einer kürzlich durchgeführten Studie nutzten Biologen die COS-1-Zelllinie zur Herstellung von Equine Chorionic Gonadotropin, einem rekombinanten Reproduktionshormon für reproduktive Anwendungen [3]. In einer anderen Studie wurden COS-1-Zellen zur Herstellung eines rekombinanten monoklonalen Antikörpers gegen einen bestimmten Typ des Influenzavirus verwendet [4].
- Produktion von virusähnlichen Partikeln: COS-1-Zellen dienen als Verpackungswirte für die Produktion hochwertiger Lentiviren und können für die Herstellung viraler Impfstoffe verwendet werden. In einer Studie wurde die COS-1-Zelllinie zur Herstellung von nicht infektiösen, aber hoch immunogenen Dengue-Virus-ähnlichen Partikeln verwendet, die wirksame Impfstoffkandidaten sind [5].
4.cOS-1-Zellen: Veröffentlichungen
Einige bemerkenswerte Veröffentlichungen über COS-1-Zellen sind:
- Production and Purification of Dengue Virus-like Particles from COS-1 Cells: Diese Veröffentlichung in Bio-Protocol erläutert die Verwendung von COS-1-Zellen zur Herstellung hoch immunogener Dengue-Virus-ähnlicher Partikel.
- Expressionsanalyse von rekombinantem equinem Choriongonadotropin in drei Wirtssystemen - E. coli BL21C, Sf-Insektenzell-Lysat und COS-1-Säugerzellen: In dieser Studie haben die Forscher die Produktion und posttranslationale Modifikation eines rekombinanten Fortpflanzungshormons, z. B. des equinen Choriongonadotropins, in verschiedenen Expressionssystemen einschließlich COS-1-Säugetierzellen verglichen.
- Untersuchung von durch Zecken übertragenen Flaviviren-ähnlichen Partikeln als Trägersystem für die Gentherapie: In dieser Studie wurden COS-1-Zellen zur Herstellung von FSME-Virus-ähnlichen Partikeln verwendet. Diese Partikel werden als Shuttle für die Übertragung der benötigten Replikons (d.h. der therapeutischen Gene) vorgeschlagen.
- Herstellung eines rekombinanten monoklonalen Antikörpers vom Huhn gegen die Neuraminidase des Vogelgrippevirus H9N2: In diesem in der Fachzeitschrift AMB Express veröffentlichten Artikel wurden COS-1-Zellen verwendet, um rekombinante monoklonale Antikörper in Hühnerform gegen die Neuraminidase des Vogelgrippevirus vom Typ H9N2 herzustellen.
- Waschmittelfreie Solubilisierung von menschlichen Kv-Kanälen, die in Säugetierzellen exprimiert werden: In dieser Studie wurde die Säugetierzelllinie COS-1 zur Expression menschlicher Kv-Kanäle verwendet, um einige Solubilisierungsexperimente durchzuführen.
5.ressourcen für die Zelllinie COS-1, einschließlich Protokollen, Videos und mehr
Zellkultur-Protokolle
- COS-1-Zellkultur: Dieser Link enthält wertvolle Informationen über die Teilung, das Einfrieren und das Auftauen von COS-1-Zellen.
- COS-1-Zellen: Dieser Link enthält grundlegende Informationen über die COS-1-Zelllinie.
Transfektionsprotokolle
Hier finden Sie einige Quellen, die die Transfektionsmethode für COS-1-Zellen beschreiben.
- Transiente Transfektion von COS-1-Zellen: Dieses Dokument enthält ein Protokoll für die transiente Transfektion der COS-1-Zelllinie.
Videos zur COS-1-Zelllinie
Die folgenden Videos können Ihnen helfen, allgemeine Informationen über die Kultivierung, Pflege und Transfektion von COS-1-Zellen zu erhalten.
- Passage von Zellen: In diesem Video werden grundlegende Kultivierungspraktiken für Säugetierzelllinien erörtert.
- Einfrieren adhärenter Zellen: Dieses Video enthält Informationen zum Einfrieren von adhärenten Zelllinien.
- Transfektionsprotokoll: Dieses Video zeigt ein Verfahren zur Transfektion von Säugetierzellen.
6.kultivierung von COS-1-Zellen
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Charakteristisch |
Informationen |
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Verdopplungszeit |
Ungefähr 48 Stunden |
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Adhärent oder in Suspension |
Adhärent wächst als Monolayer auf der Oberfläche des Kulturkolbens |
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Aussaatdichte |
2 bis 4 x 10^4 Zellen/cm²; adhärente Zellen werden mit 1x PBS gewaschen, mit Accutase behandelt, zentrifugiert, resuspendiert und in ein neues Gefäß gegeben |
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Wachstumsmedium |
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) mit 10 % FBS; das Medium sollte 2 bis 3 Mal pro Woche ausgetauscht werden |
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Wachstumsbedingungen (Temperatur, CO2) |
Benötigt einen befeuchteten Inkubator mit 5% CO2 und 37°C Temperatur |
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Lagerung |
Unter -150°C in der Dampfphase von flüssigem Stickstoff |
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Einfrierverfahren und -medium |
Langsames Einfrierverfahren mit einem Temperaturabfall von nur 1 °C unter Verwendung von CM-1- oder CM-ACF-Medien |
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Auftauprozess |
Gefrorene Zellen in einem auf 37 °C eingestellten Wasserbad 40-60 Sekunden lang unter schneller Bewegung auftauen. Zentrifugieren Sie die Zellen, um das Gefriermedium zu entfernen, resuspendieren Sie das Pellet, und geben Sie es in eine Kulturflasche mit frischem Medium. Die Adhäsion dauert etwa 24 Stunden. |
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Biologische Schutzstufe |
Für den Umgang mit COS-1-Zellen wird Biologische Schutzstufe 1 empfohlen |
Wir hoffen, dass dieser Artikel eine ausreichende Menge an Informationen geliefert hat, um Ihnen die Arbeit mit COS-1-Zellen zu erleichtern. Bitte bestellen Sie bei uns, wenn Sie diese Zelllinie für Ihre Forschungsstudie verwenden möchten.
Quellenangaben
- Smith, S.L. und T. Shioda, Advantages of COS-1 monkey kidney epithelial cells as packaging host for small-volume production of high-quality recombinant lentiviruses. Zeitschrift für virologische Methoden, 2009. 157(1): p. 47-54.
- MacKenzie, C.J. und T. Shioda, COS-1Cells as Packaging Host for Production of Lentiviruses. Current protocols in cell biology, 2011. 50(1): p. 26.7. 1-26.7. 15.
- Bhardwaj, A., et al., Expressionsanalyse von rekombinantem equinem Choriongonadotropin in drei Wirtssystemen: E. coli BL21C, Sf-Insektenzell-Lysat und COS-1-Säugetierzellen. Indian Journal of Animal Research, 2021. 55(1): p. 40-45.
- Wang, F., et al., Generation eines rekombinanten monoklonalen Antikörpers vom Huhn gegen die Neuraminidase des Vogelgrippevirus H9N2. AMB Express, 2020. 10: p. 1-7.
- Galula, J.U., G.-J.J. Chang, and D.-Y. Chao, Production and Purification of Dengue Virus-like Particles from COS-1 Cells. Bio-protocol, 2019. 9(12): p. e3280-e3280.